細(xì)菌新型生化鑒定管使用說(shuō)明
――071821 單核增生李斯特氏菌生化鑒定盒（13種×10次）（SN標(biāo)準(zhǔn)）
一）單核增生李斯特氏菌生化鑒定盒（SN標(biāo)準(zhǔn)） 整套試劑及用品
定生化反應(yīng)的13種試劑（表1）、0.85%無(wú)菌生理鹽水10瓶、0.5 McFarland的濁度管1瓶、一次性吸管10支。
二）生化管的使用方法
開(kāi)啟西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在無(wú)菌條件下，按鋁蓋上的箭頭方向打開(kāi)鋁蓋，撕開(kāi)鋁蓋，打開(kāi)西林瓶膠塞（如圖1）。所有的西林瓶在使用后均高壓滅菌后方可棄去。
三）單核增生李斯特氏菌生化鑒定盒的詳細(xì)使用方法
挑取選擇性培養(yǎng)基上的可疑菌落接種TSA-YE瓊脂平板上于35℃純培養(yǎng)24h后進(jìn)行菌落顏色、鏡檢等項(xiàng)目使用。
藍(lán)色菌落檢驗(yàn)：用45°光斜射TSA-YE瓊脂平板，菌落呈藍(lán)灰色到藍(lán)色。用標(biāo)準(zhǔn)菌株作為陽(yáng)性對(duì)照。將純培養(yǎng)后的菌落接種于TSB-YE肉湯，35℃培養(yǎng)24h，供生化等項(xiàng)目檢驗(yàn)使用。
典型運(yùn)動(dòng)鏡檢：挑取在TSA-YE瓊脂平板上生長(zhǎng)良好的菌落于潔凈載玻片上，李斯特氏菌為革蘭氏陽(yáng)性小桿菌，大小為0.4～0.5μm×0.5～2.0μm；用生理鹽水制成菌懸液，在油鏡或相差顯微鏡下觀察，該菌出現(xiàn)輕微旋轉(zhuǎn)或翻滾樣的運(yùn)動(dòng)。
過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)：挑取TSA-YE平板上的菌落于潔凈載玻片上，滴加1滴3%的過(guò)氧化氫（H2O2）溶液，李斯特氏菌呈過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性反應(yīng)。
溶血試驗(yàn)：從每個(gè)TSA-YE瓊脂平板上至少挑取2個(gè)菌落刺種血平板，35℃培養(yǎng)24h～48h。
生化鑒定：將TSB-YE肉湯培養(yǎng)物接種于每種微量西林瓶?jī)?nèi)。將已接種的西林瓶再套上膠塞，一般采用全加塞（如圖2左兩瓶所示），特殊情況在下表注明采用半加塞（如圖2右兩瓶所示），直立于內(nèi)托的凹槽內(nèi)（如圖2），或放置于合適的瓶架中，于35－37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果觀察見(jiàn)表1。
注意：如有特殊的接種方式、培養(yǎng)時(shí)間或培養(yǎng)方式，請(qǐng)?jiān)斠?jiàn)每種生化鑒定管附帶的使用說(shuō)明。
| 表1 | |||||
| 產(chǎn)品名稱(chēng) | 結(jié)果判定 | 培養(yǎng)時(shí)間 | 使用說(shuō)明 | ||
| 陽(yáng)性 | 陰性 | ||||
| 硝酸鹽（還原） | 深紅色 | 略帶淡粉紅色 | 5d | 西林瓶半加塞（如圖2右兩瓶所示）培養(yǎng)后加硝酸鹽還原試劑甲、乙液各2滴，混勻，立即觀察結(jié)果。 | |
| 3%過(guò)氧化氫溶液 | 劇烈起泡 | 無(wú)氣泡 | -- | 直接滴加在玻片的新鮮菌苔涂片上。 | |
| 葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、木糖、鼠李糖 | 黃色 | 紫色 | 24h—5d | ||
| 葡萄糖磷酸鹽胨水（MR） | 紅色 | 不變色 | 48h | 西林瓶半加塞（如圖2右兩瓶所示）培養(yǎng)后加MR試劑2－3滴，立即觀察結(jié)果。 | |
| 葡萄糖磷酸鹽胨水（VP） | 紅色 | 不變色 | 48h | 西林瓶半加塞（如圖2右兩瓶所示）培養(yǎng)后依次加入8滴VP試劑甲液及4滴乙液，混勻，再培養(yǎng)10－20分鐘觀察結(jié)果。 | |
| 尿素 | 桃紅色 | 淡橙紅色 | 24h—5d | 打開(kāi)西林瓶膠塞后，向西林瓶中加入所配備的1.5mL/瓶的無(wú)菌水，充分溶解。再用接種針挑取新鮮菌苔直接接種于西林瓶?jī)?nèi)。接種后，置于35-37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，逐日觀察結(jié)果。 | |
| 七葉苷 | 棕黑色 | 不變色 | 24h—5d | ||
| SIM培養(yǎng)基 | 擴(kuò)散生長(zhǎng)，成傘狀 | 無(wú)擴(kuò)散生長(zhǎng) | 25℃，2—5d | 用接種針挑取新鮮菌苔穿刺，豎立培育。 | |
| 三糖鐵瓊脂 | 產(chǎn)氣 | 有氣泡 | 無(wú)氣泡 | 24h-5d | 用接種針挑取新鮮菌苔穿刺，穿刺完畢后在斜面上劃“之”字形接種，豎立培育。西林瓶半加塞（如圖2右兩瓶所示）后豎立培育。 |
| 分解蔗糖或乳糖 | 斜面和底層變黃色 | 不變色 | |||
| 分解葡萄糖 | 底層變黃，斜面不變色或者紅色加深 | 不變色 | |||
| 產(chǎn)H2S | 變黑色 | 不變色 | |||
| 備注：本鑒定盒是按照環(huán)凱產(chǎn)品目錄中的品種成份從左到右的順序擺放。 | |||||
四）單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的主要生化特性及有關(guān)菌的區(qū)別見(jiàn)表2。（只供參考）
