最近瀏覽
產(chǎn)品名稱(chēng)：Simple Cloning T-vector(pSC-T)
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKT001-01A | Simple Cloning T-vector(pSC-T) | 20次 | T載體 | 540 |
產(chǎn)品描述：
Simple Cloning T-vector（pSC-T）是一種 PCR 產(chǎn)物高效 TA 克隆的專(zhuān)用 T 載體，本載體消除了 PCR 產(chǎn)物插入?yún)^(qū)域兩側(cè)的 多克隆位點(diǎn)。
在 PCR 克隆構(gòu)建過(guò)程中，為了進(jìn)一步的克隆步驟，常會(huì) 在PCR 產(chǎn)物的兩端引入專(zhuān)門(mén)的酶切位點(diǎn)，如 T 載體上已帶有 相同的酶切位點(diǎn)，會(huì)對(duì)下一步的酶切連接帶來(lái)不利的影響。為 消 除 多 克 隆 酶 切 位 點(diǎn) 帶 來(lái) 的 負(fù) 作 用 ， Simple Cloning T- Vector去除了PCR 產(chǎn)物插入?yún)^(qū)域兩側(cè)所有的酶切位點(diǎn)。帶有酶 切位點(diǎn)的 PCR 產(chǎn)物克隆后進(jìn)行酶切時(shí)，T 載體上不會(huì)有相同 的酶切位點(diǎn)影響酶切反應(yīng)，可以大大提高酶切效率，增加亞 克隆成功率。多克隆位點(diǎn)的消除并不影響 β-半乳糖苷酶的正 常表達(dá)，PCR 產(chǎn)物克隆后仍可以利用 α-互補(bǔ)性進(jìn)行藍(lán)白斑篩 選，挑選陽(yáng)性克隆。
由于本載體上消除了多克隆酶切位點(diǎn)，在 PCR 擴(kuò)增引物設(shè) 計(jì)時(shí)需要考慮導(dǎo)入合適的酶切位點(diǎn)。
Simple Cloning T-vector(pSC-T) 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
操作方法：
1） 選擇合適的連接體系（詳細(xì)介紹見(jiàn)背面）。
2） 取10μL 加入至 100μL 感受態(tài)細(xì)胞中，用移液 槍吹打混合，冰上放置30 分鐘。
3） 將離心管置于 42℃水浴中，熱擊 60-90 秒，迅 速將離心管置于冰上，放置 2-3 分鐘。
4） 向每個(gè)離心管中加入 500μL 無(wú)菌不含抗生素的 LB 或SOC 培養(yǎng)基中，37℃搖床，150rpm 振蕩培養(yǎng) 45 分鐘，使質(zhì)粒上氨芐抗性基因表達(dá)，菌體復(fù)蘇。
5） 吸取200μL 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含氨芐 青霉素的 LB 或SOC 固體平板上，用無(wú)菌涂布棒將細(xì) 胞均勻涂開(kāi)，將平板置于 37℃培養(yǎng)箱里直至液體完全 吸收，倒置培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。
6） PCR檢測(cè)，利用試劑盒自帶的高速PCR擴(kuò)增試 劑2×FastTaq Mast Mix直接進(jìn)行菌落PCR鑒定。
