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空腸彎曲菌的生物學(xué)特性
生物學(xué)特性：彎曲菌屬是一類耐熱微需氧菌，革蘭氏染色陰性。彎曲菌體彎曲如小逗點(diǎn)狀，菌體兩端相接時(shí)呈“S”形、螺旋狀或海鷗展翅狀，菌體一端或兩端有鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，無(wú)芽孢。彎曲菌包括17個(gè)種和8個(gè)亞種，引起人類感染致病菌的彎曲菌中80%~90%都是空腸彎曲菌。
流行學(xué)特征：空腸彎曲菌廣泛分布于自然界中，是人畜共患致病菌微生物，人類感染主要是以食用生的、未徹底加熱的禽肉和消毒不充分的牛奶為主，衛(wèi)生較差的地區(qū)則以水源性傳播多見(jiàn)。臨床表現(xiàn)為急性或自限性腸炎，癥狀和普通腸炎類似，20%以上患者會(huì)出現(xiàn)病情復(fù)發(fā)或病程延長(zhǎng)現(xiàn)象，嚴(yán)重者會(huì)并發(fā)格林-巴利綜合征。
空腸彎曲菌的檢驗(yàn)
操作注意事項(xiàng)
1：對(duì)易產(chǎn)生較大顆粒的樣品（如肉類、貝類）進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，建議使用帶濾網(wǎng)均質(zhì)袋，以便均質(zhì)后用吸管吸取勻液；
2：檢測(cè)含乳制品時(shí)，均質(zhì)后后應(yīng)檢測(cè)pH值。如有必要，用1mol/mL無(wú)菌NaOH或HCl調(diào)整pH值到7.5±0.2；
3：馬尿酸鈉水解實(shí)驗(yàn)和吲哚乙酸酯水解實(shí)驗(yàn)中，為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需要挑取培養(yǎng)狀態(tài)良好的新鮮菌落，菌量應(yīng)該足夠大；
4：馬尿酸鈉水解實(shí)驗(yàn)中，加入茚三酮溶液后，不要震蕩，36℃±1℃水浴或培養(yǎng)箱溫浴10min后及時(shí)觀察結(jié)果，不可放置時(shí)間太長(zhǎng)，以免干擾結(jié)果判讀；
培養(yǎng)基原理解析
1、Bolton肉湯
? 配方中乳白蛋白水解物、動(dòng)物組織酶解物提供碳、氮源；酵母浸膏提供各種維生素；氯化鈉維持均衡的滲透壓；丙酮酸鈉和偏亞硫酸氫鈉能中和培養(yǎng)基的有毒物質(zhì)，也能增強(qiáng)培養(yǎng)基的空氣耐受力；a-酮戊二酸提供生長(zhǎng)因子，促進(jìn)空腸彎曲菌的生長(zhǎng)；碳酸鈉提供空腸彎曲菌最有利的酸堿環(huán)境；頭孢派酮和多粘菌素B抑制革蘭氏陰性菌；萬(wàn)古霉素和三甲氧芐胺嘧啶抑制革蘭氏陽(yáng)性菌；兩性霉素B抑制酵母和真菌的生長(zhǎng)。
2、改良CCD瓊脂
? 配方中肉浸液、動(dòng)物組織酶解物、酪蛋白酶解物提供碳、氮源、維生素、生長(zhǎng)因子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；木炭具有解毒、收集二氧化碳和改變表面張力的作用；去氧膽酸鈉為選擇性抑菌劑；頭孢哌酮可抑制普通腸道菌生長(zhǎng)、兩性霉素B 抑制酵母和真菌生長(zhǎng)、利福平可抑制非彎曲菌其他厭氧菌。硫酸亞鐵和丙酮酸鈉有利于空腸彎曲菌的生長(zhǎng)；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
? mCCD瓊脂平板上的可疑空彎菌落通常為淡灰色，有金屬光澤、潮濕扁平，呈擴(kuò)散生長(zhǎng)的傾向。
空腸彎曲菌為灰色菌落
3、Skirrow瓊脂
? 配方中蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸膏提供碳、氮源、維生素、生長(zhǎng)因子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；丙酮酸鈉、焦亞硫酸鈉、硫酸亞鐵有利于彎曲菌的生長(zhǎng)。頭孢呱酮可抑制革蘭氏陰性細(xì)菌和部分革蘭氏陽(yáng)性菌、兩性霉素B 抑制真菌生長(zhǎng)、利福平可抑制非彎曲菌其他厭氧菌。瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
空腸彎曲菌為灰色濕潤(rùn)單菌落或沿接種線擴(kuò)散生長(zhǎng)
4、哥倫比亞血瓊脂
? 配方中動(dòng)物組織酶解物、淀粉提供碳氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；羊血是細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的良好營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。在45～50℃的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入血液可以保存血液中某些不耐熱的生長(zhǎng)因子，同時(shí)血球不被破壞。慶大霉素能抑制腸桿菌科和銅綠假單胞菌的生長(zhǎng)。
空腸彎曲菌為灰色濕潤(rùn)沿接種線擴(kuò)散生長(zhǎng)菌落
5、氧化酶試驗(yàn)
? 原理：氧化酶使細(xì)胞色素C氧化，氧化型細(xì)胞色素C再氧化對(duì)苯二胺試劑形成紫色復(fù)合物，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。
? 操作：滴加1滴氧化酶試劑到一小塊潔凈濾紙上，用玻棒或接種環(huán)（鉑或塑料）挑取適量新鮮菌苔涂在試劑潤(rùn)濕的紙片上；30秒內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)紫色為陽(yáng)性，延遲反應(yīng)或無(wú)顏色變化為陰性。
6、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)
? 具有過(guò)氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過(guò)氧化氫生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。
? 操作：挑取一環(huán)菌落培養(yǎng)物，加到在干凈顯微鏡玻片上的一滴3％過(guò)氧化氫溶液中，如果在30秒內(nèi)出現(xiàn)氣泡則判定結(jié)果為陽(yáng)性。
過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性
7、馬尿酸鈉水解試驗(yàn)
? 原理：細(xì)菌具有馬尿酸鈉水解酶，可將馬尿酸鈉水解為甘氨酸和苯甲酸，甘氨酸可與茚三酮反應(yīng)生成紫色化合物。
? 操作：挑取欲檢測(cè)的菌落培養(yǎng)物，加到盛有0.4mL 1％的馬尿酸鈉的試管中制成菌懸液，注意不要帶入培養(yǎng)基瓊脂?；旌暇鶆蚝笤?7℃水浴中溫育2 h或36℃培養(yǎng)箱中溫育4 h。輕輕地在馬尿酸鹽溶液的頂部加入0.2mL茚三酮溶液，不要振蕩，在37℃水浴或36℃培養(yǎng)箱中溫育10 min后判讀結(jié)果。若出現(xiàn)黑紫色則為陽(yáng)性；若出現(xiàn)淡紫色或沒(méi)有顏色變化則為陰性。
馬尿酸鈉水解試驗(yàn)陽(yáng)性
8、吲哚乙酸酯水解試驗(yàn)
? 挑取欲檢測(cè)的菌落培養(yǎng)物，加到羥基吲哚醋酸鹽紙片上面，再滴加一滴滅菌蒸餾水。如果吲哚乙酸脂水解，則在5～10min內(nèi)出現(xiàn)深藍(lán)色；若沒(méi)有顏色變化則表示水解反應(yīng)沒(méi)有發(fā)生。
吲哚乙酸水解試驗(yàn)陽(yáng)性
空腸彎曲菌的生化特性
質(zhì)量控制及疑難解析
質(zhì)量控制
1、實(shí)驗(yàn)室過(guò)程中，每批預(yù)增菌液、選擇性增菌液、分離平板等都要做空白對(duì)照。以掌握檢驗(yàn)過(guò)程中是否存在來(lái)自檢驗(yàn)環(huán)境的污染。
2、定期使用空腸彎曲菌ATCC33291或相應(yīng)定量活菌參考品，在P2實(shí)驗(yàn)室或陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，用適當(dāng)?shù)氖称窐悠愤M(jìn)行陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，污染劑量應(yīng)控制在10-100CFU/25g，并進(jìn)行記錄，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)至少每2個(gè)月進(jìn)行1次次。
疑難解析
問(wèn)：空腸彎曲菌在mCCDA瓊脂的形態(tài)是否僅限于正文所述？還有無(wú)其他形態(tài)？
答：空腸彎曲菌在mCCDA瓊脂平板上的形態(tài)與在Skirrow瓊脂平板上相似，但也有可能出現(xiàn)2種形態(tài)，一種為有光澤、潮濕、扁平菌落，呈擴(kuò)散生長(zhǎng)的傾向，另一種為分散凸起、有金屬光澤的單個(gè)菌落，直徑約為1~2mm。
問(wèn)：在前增菌或選擇性增菌結(jié)束后，肉湯未見(jiàn)微生物生長(zhǎng)，是否可以終止實(shí)驗(yàn)?
答：不可以，因?yàn)槿鉁梢?jiàn)的細(xì)菌濃度為107CFU/ml，在此濃度一下，肉眼不能發(fā)現(xiàn)微生物生長(zhǎng)，但實(shí)際溶液中有微生物生長(zhǎng)。
所需培養(yǎng)基試劑
| 用途 | 貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
| 增菌 | C-43 | 圓底立式培養(yǎng)袋 | 10個(gè)/包 |
| C-2 | 2.5L 微需氧產(chǎn)氣劑 | 10袋/包 | |
| 28025 | 0.1% 蛋白胨水 | 250g | |
| 27380 | Bolton肉湯基礎(chǔ) | 250g | |
| SR0340 | Bolton肉湯配套試劑 | 10支/盒 | |
| CP0570A | Bolton肉湯（含羊血，抗生素） | 100mL×6瓶 | |
| CP0571 | Bolton肉湯（含羊血，抗生素） | 225mL×6瓶 | |
| CP0211 | Bolton肉湯（含羊血，抗生素） | 10mL×20支 | |
| 篩選及純化 | 27382 | 改良CCD瓊脂基礎(chǔ) | 250g/瓶 |
| SR0320 | 改良CCD瓊脂基礎(chǔ)配套試劑 | 10支/盒 | |
| CP0580 | 改良CCD瓊脂平板 | 90mm×20/盒 | |
| 27385 | Skirrow瓊脂基礎(chǔ) | 250g/瓶 | |
| SR0330 | Skirrow瓊脂配套試劑 | 10支/盒 | |
| CP0590 | Skirrow血瓊脂平板 | 90mm×20/盒 | |
| 29010 | 革蘭氏染色液 | 10mL×4瓶 | |
| 29170 | 氧化酶試紙 | 10片/盒 | |
| 24061 | 哥倫比亞血瓊脂 | 250g/瓶 | |
| CP0160 | 哥倫比亞血瓊脂平板 | 90mm×20/盒 | |
| 生化鑒定 | 29161 | 3%過(guò)氧化氫溶液 | 2mL×10支 |
| 75770 | 馬尿酸鹽 | 20支/盒 | |
| 29231 | 茚三酮試劑 | 10mL/瓶 | |
| SR0360 | 吲哚乙酸酯紙片 | 20片/盒 |
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