噬菌體擴(kuò)增結(jié)合環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增 （PA-LAMP） 用于快速檢測生禽肉中的活腸炎沙門氏菌
沙門氏菌屬是全球主要的食源性病原體之一。該屬由2600多種不同的血清型組成，即鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌，它們主要導(dǎo)致人類沙門氏菌病病例。
沙門氏菌可以存在于多種食物中，但雞蛋和肉類等家禽產(chǎn)品是食物鏈中的主要來源。
雞肉的生產(chǎn)具有戰(zhàn)略意義，因?yàn)樗亲罱?jīng)濟(jì)的肉類之一，也是全球消費(fèi)量最大的肉類之一。歐盟在2022年生產(chǎn)了 980 萬噸雞肉，并從巴西、泰國和烏克蘭進(jìn)口了高價值家禽產(chǎn)品，包括胸肉和家禽制品。歐盟在第1086/2011號法規(guī) （EC）確定了25克新鮮禽肉中不含鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌的標(biāo)準(zhǔn)。
因此，及時檢測沙門氏菌十分重要。
現(xiàn)有的基于 DNA 的技術(shù)檢測方法的一個典型局限性是它們無法區(qū)分活的微生物和非活的微生物。然而噬菌體可以專門感染和復(fù)制活細(xì)菌細(xì)胞，噬菌體僅在存在目標(biāo)細(xì)菌時繁殖，而不是檢測細(xì)菌本身，因此基于噬菌體的檢測可以僅僅檢測活菌。
此外，單個噬菌體感染每個細(xì)菌細(xì)胞會產(chǎn)生數(shù)十到數(shù)百個新的病毒顆粒，從而提高了相同范圍內(nèi)該方法的檢測限。
在本研究中，作者利用沙門氏菌噬菌體vB_SenS_PVP-SE2 (PVP-SE2) 結(jié)合LAMP擴(kuò)增開發(fā)了一種新的腸炎沙門氏菌檢測方法，噬菌體PVP-SE2的潛伏期為 15分鐘，上升期為15分鐘，每個感染細(xì)胞平均有240個后代噬菌體，能夠縮短檢測沙門氏菌所需的富集期。因此，該方法允許在同一天 （8 h） 檢測活細(xì)胞。并將該方法在加標(biāo)雞胸肉樣品中進(jìn)行了評估。
圖 1 熒光可視化圖片
結(jié)論：該研究成功開發(fā)了用于檢測雞胸肉中活腸炎沙門氏菌的PA-LAMP 測定法。在大約8小時內(nèi)，包括樣品預(yù)富集、DNA 提取和LAMP，可以檢測到 1.1 CFU/25 g 的食品樣品。這使得該方法適用于當(dāng)天檢測。此外，熒光可視化方法的開發(fā)允許該方法應(yīng)用于現(xiàn)場檢測。總而言之，本研究開發(fā)了一種新的、快速的、簡單的、非技術(shù)要求高且經(jīng)濟(jì)的方法，可以在同一個工作日內(nèi)檢測出活腸炎沙門氏菌，其結(jié)果與參考方法（ISO 6579）相當(dāng)。
參考來源：Lamas A, Santos SB, Prado M, Garrido-Maestu A. Phage amplification coupled with loop-mediated isothermal amplification (PA-LAMP) for same-day detection of viable Salmonella Enteritidis in raw poultry meat. Food Microbiol. 2023 Oct;115:104341. doi: 10.1016/j.fm.2023.104341. Epub 2023 Jul 11. PMID: 37567642.
來源：微生物安全與健康網(wǎng)，作者~翟慧潺。
