產(chǎn)品名稱：阪崎克羅諾桿菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
英文名稱：PCR Detection Kit for Cronobacter sakazakii (Fluorescent Probe Assays)
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 規(guī)格 |
| FZ010BF2 | 48 測試/盒 |
產(chǎn)品簡介：本試劑盒適用于食品中阪崎克羅諾桿菌的檢測。
檢測原理：基于 Real Time PCR 技術(shù)，利用針對于阪崎克羅諾桿菌特異性基因的引物、熒光探針以及其他反應(yīng)所需試劑，加入待檢樣品即可進行擴增反應(yīng)。在發(fā)生擴增過程中，熒光探針與目的基因片段結(jié)合，可被 Taq 酶分解并產(chǎn)生熒光信號，此時熒光定量 PCR 儀可識別該熒光信號，同時根據(jù)其強弱變化繪制出相應(yīng)的實時擴增曲線，進而判定阪崎克羅諾桿菌是否檢出。
阪崎克羅諾桿菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分：
儲存條件與保質(zhì)期：-20℃避光儲存，有效期為12個月，避免反復(fù)凍融。
靈敏度：最低檢驗限達到100 CFU/Test
所需其他材料和適用儀器：熒光定量 PCR 儀（具有能夠檢測 FAM 標(biāo)記的熒光通道）、高速離心機、移液器、移液槍頭及離心管等。
阪崎克羅諾桿菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南：
1，樣品前處理
1) 樣品增菌液模板 DNA 的制備：
a) 樣品增菌：參照 GB 4789.40-2016《食品微生物學(xué)檢驗克羅諾桿菌屬檢驗》，取樣品 100 g（mL），加入到盛有 900 mL 緩沖蛋白胨水（BPW）的無菌容器中均質(zhì)，36±1℃培養(yǎng) 18-24 h；
b) 吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，6000 r/min 離心 5 min，棄上清，用 50 μL 無菌超純水懸浮洗滌沉淀 1-2次，6000 r/min 離心 5 min，完全去除上清；
c) 加入 30 μL 裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱 10 min；
d) 12000 r/min 離心 15 min，上清即為粗提的 DNA，可轉(zhuǎn)移至 0.2 mL 無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。
2) 可疑菌落模板 DNA 的制備：挑取可疑菌落，充分懸浮于預(yù)先加有 30 μL 裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟 c)、d)操作。
2, 加樣、反應(yīng)
1) 按照需求取 n 個 PCR 反應(yīng)管（n=1 管陰性對照+待檢測樣品數(shù)+1 管陽性對照），從試劑盒中取出預(yù)混液，充分融化，渦旋后短暫離心，以上每管加入 20 μL 預(yù)混液，待用。
2) 向上述 n 個反應(yīng)管中分別加入陰性對照、待測樣品 DNA、陽性對照各 5 μL，蓋緊管蓋，短暫離心，立即進行 PCR 擴增反應(yīng)。
3) PCR 反應(yīng)體系為 25 μL，取 FAM 檢測通道，在反應(yīng)階段 2 中 60℃時收集熒光信號，具體程序如下：
| 反應(yīng)階段 | 溫度 | 時間 | 信號收集 | 循環(huán)數(shù) |
| 1 | 95°C | 30 sec | 1 | |
| 2 | 95°C | 5 sec | } 40 | |
| 60°C | 30 sec | ? |
3, 結(jié)果：一般情況下，可通過軟件自動設(shè)定的基線、閾值等直接讀取檢測結(jié)果。如需調(diào)整，可根據(jù)所使用儀器的自身情況（如噪聲等）以及選取的不同熒光通道進行調(diào)整。
1) 質(zhì)量控制：陰性對照未出現(xiàn)明顯的 S 型擴增曲線或Ct 值＞35，陽性對照出現(xiàn) S 型擴增曲線且其 Ct 值＜30。若陰陽性對照未能同時滿足上述條件，則本次檢測結(jié)果無效，應(yīng)重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
2) 結(jié)果判讀：（根據(jù)反應(yīng)所得 Ct 值判讀，具體見下表：）
| Ct值 | 結(jié)果判讀 |
| ≤35 | 阪崎克羅諾桿菌陽性。 |
| 35~37 | 建議重新檢測，若結(jié)果 C≥37，則阪崎克羅諾桿菌陰性，反之則為阪崎克羅諾桿菌陽性。 |
| ≥37 | 阪崎克羅諾桿菌陰性。 |
更多實時熒光PCR檢測試劑盒(食源性致病菌檢測系列) 產(chǎn)品列表：
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